Projetos de pesquisa finalizados

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Projeto de pesquisa


  • Identificar e caracterizar proteínas RNA-ligantes contendo os motifs RNP1 e RNP2 nos terminais pré-sinápticos dos neurônios fotorreceptores de lulas
     

     
  • Coordenador do projeto: Roy Edward Larson  
  • Autor ou executor principal do projeto: Diego Torrecillas Paula Lico  
  • Número do projeto: 822  
  • Categoria: Pós-doutorado 
  • Data de início das atividades no CEBIMar: 25/02/2013  
  • Data de término das atividades no CEBIMar: 31/03/2014  
  • Resumo: Este projeto faz parte de uma proposta (projeto regular de Pós-Doutorado) aprovada pela FAPESP/Processo 2011/13635-9. Identificamos e parcialmente caracterizamos uma proteína RNA-ligante de 65 kDa (p65) como um novo membro da família de proteínas RNA-ligante pertencente ao grupo hnRNPA nos terminais pré-sinápticos dos neurônios fotorreceptores de lulas (Loligo plei, espécie do Atlântico Sul e Loligo pealei, espécie do Atlântico Norte). A p65 foi inicialmente identificada com base na sua imunorreatividade a um anticorpo policlonal, C4, Lico  D.T.P et al., 2010. A fim de determinar se a p65 tem uma função sináptica, microinjectado o anticorpo C4 no terminal pré-sináptico da sinapse gigante de lulas e o resultado foi que este anticorpo (C4) bloqueou a neurotransmissão sináptica Roy E. Larson et al., manuscrito submetido. Análises in silico partindo das sequências de aminoácidos da p65 purificada obtidas por espectrometria de massas, onde que sua identidade foi buscada em um banco de expressed sequence tag (ESTs) de L. pealei, localizamos com uma cobertura de 94% de identidade (46 de 49 aminoácidos) um contig (contig 976) de L.pealei. Este contig apresentou uma fase aberta de leitura (ORF) capaz de codificar uma proteína de 37 kDa, que possui os domínios estruturais RNA recognition motifs (RRMs), também referido aqui como RNA binding protein domains (RBP1 e RBP2) conservados. Os motifs RNPs estão dispostos de forma duplicada e ordenada no sentido N-terminal para C-terminal como 2xRBP2/RBP1, juntamente com RGG box e poli-G. Para comprovarmos uma correlação estrutural entre o contig 976 e a p65, produzimos anticorpos específicos policlonais imunorreativos a um peptídeo sintético d
     
  • Metodologia: Materiais e métodos (esta parte se aplica a metodologia inicial desenvolvida no CEBIMar)
    Captura de lulas.As lulas L. plei serão coletadas na praia do Jabaquara (Município de Ilha Bela) e praia de Barequeçaba (Município de São Sebastião), litoral norte do Estado de São Paulo, nos meses de verão com o apoio do CEBIMar-USP em São Sebastião. No próprio laboratório do CEBIMar dissecamos lóbulos ópticos de lulas (LOL) e congelamos em N2 líquido, para serem transportados. Estes serão analisados em ensaios de bioquímica.  
    (comunicaremos se houver outras necessidades para outros experimentos)
     
  • Etapas e cronograma:  Durante os meses de novembro a março (verão) de 2013-2014 época de lula no Litoral Norte do estado de São Paulo, realizaremos a coletada  de animais na praia do Jabaquara (Município de Ilha Bela) e praia de Barequeçaba (Município de São Sebastião). 
     
  • Palavras-chave: Key words: hnRNPA; RNA recognition motif; synaptosome; neurotransmission; optic lobe; giant synapse; squid; Loligo. 
  • Condições ambientais: Nenhuma condição especial ;   
  • Área necessária no laboratório: Pequeno espaço apropriados com bancadas ou mesas com cadeira para dissecação. (comunicaremos se houver outras necessidades para outros experimentos) 
  • Equipamentos de laboratório: 1)geladeira; 2)água corrente; 3)tensão 110/220;  
  • Outros serviços de laboratório: nada consta 
  • Organismos a serem coletados: Lulas de espécie Loligo plei. 
  • Locais para coleta: As lulas L. plei serão coletadas na praia do Jabaquara (Município de Ilha Bela) e praia de Barequeçaba (Município de São Sebastião), litoral norte do Estado de São Paulo. 
  • Tipos de resíduos químicos e/ou infectantes a serem gerados durante o projeto:  
  • Quantidade de cada tipo de resíduo:
  • Periodicidade aproximada da geração dos resíduo:
  • Instituição(ções) de origem do projeto:

    • USP. Outro órgão  Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto 
     
  • Participante(s) do projeto:

    • Nome: Roy Edward Larson  
    • Função no projeto:  
    • Início das atividades no projeto: 25/02/2013  
    • Fim das atividades no projeto: 31/03/2013  
    • Observações: outros participante:
      Diego T.P.Lico, pós-doutorando, Depto. Biologia Celular e Molecular e Bioagentes Patogênicos da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo.
      Gabriel Sarti Lopes, aluno de Mestrado, Depto. Biologia Celular e Molecular e Bioagentes Patogênicos da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo.
       
     
  • Recurso(s) destinado(s) ao projeto:

    • Situação: Concedido 
    • Agência de fomento: Fapespoutros apoios de fomento: Capes, CNPq e FAEPA 
    • Tipo de recurso: Bolsa 
    • Especificar o tipo de recurso: Projeto regular Processo 2011/13635-9 
    • Recursos em nome de: Diego Torrecillas Paula Lico 
     

    Produção(ões) bibliográfica(s) gerada(s) pelo projeto:

    Total de produções bibliográficas: 0


  • Data de cadastro do projeto: 19/02/2013  
  • Data da última modificação: 19/04/2013  
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