Projetos de pesquisa finalizados

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Projeto de pesquisa


  • Ação do equinocromo na resposta imune inata do ouriço-do-mar Lytechinus variegatus (Lamarck, 1816)

     
  • Coordenador do projeto: José Roberto Machado Cunha da Silva  
  • Autor ou executor principal do projeto: Andrews Krupinski Emerenciano  
  • Número do projeto: 788  
  • Categoria: Mestrado 
  • Data de início das atividades no CEBIMar: 01/06/2012  
  • Data de término das atividades no CEBIMar: 28/03/2014  
  • Resumo:  
    O equinocromo é um pigmento naftaquinônico encontrado no interior dos grânulos de esferulócitos vermelhos, células do celoma perivisceral (celomócitos) do ouriço-do-mar Lytechinus variegatus. Esta célula tem sido considerada um biomarcador, devido ao seu aumento em número em diferentes condições de estresse. O equinocromo, que é considerado um transportador de oxigênio, age tanto na oxidação quanto na anti-oxidação de estruturas, sendo o oxidante de um sistema de oxidação-redução reversível, e é ativo contra uma série de bactérias gram-positivas e gram-negativas na concentração de 50 µg/ml. Desse modo, ele está presente nas infecções como agente bactericida e como coagulador, participando na formação de complexos que atuam em diferentes momentos fisiológicos do animal. O presente projeto pretende correlacionar o equinocromo e os processos do sistema imunológico inato, por meio da ação de diferentes concentrações de equinocromo (50 e 100 µg/ml) na atividade quimiotática e na atividade fagocítica de amebócitos fagocíticos do ouriço-do-mar. Para isso, será utilizado o Transwell para os ensaios quimiotáticos e, para os ensaios de fagocitose, os índices fagocíticos, capacidade fagocítica e a capacidade germicida dessas células frente ao LPS e leveduras. Os resultados obtidos poderão contribuir para elucidar funções ainda desconhecidas desta naftoquinona, e assim ajudar a esclarecer os mecanismos de resposta imune inata em equinodermos além da melhor avaliação destes animais.
     
     
  • Metodologia: Os ouriços serão mantidos em caixas d’água no biotério do Centro de Biologia Marinha-USP, e aclimatados por 1 semana com fotoperíodo natural e alimentados semanalmente com algas marinhas. Contagem de celomócitos e leveduras: Uma alíquota de 150µL do líquido celomático será retirada e colocada em câmara de Neubauer para contagem diferencial dos celomócitos, com microscopia de contraste de fase. A contagem total de leveduras será realizada sob microscopia de fase em câmara de Neubauer com 1mg de leveduras comerciais em 15 ml de água do mar. Teste de viabilidade fúngica: Utilizamos leveduras Saccharomyces cerevisae com viabilidade maior que 90%. Uma solução de diacetato de fluoresceína em acetona e brometo de etídeo em água do mar será utilizada para identificar as leveduras fagocitadas, vivas e mortas. Foram utilizados leveduras por serem microorganismos não patogênicos eficientes na indução de respostas inespecíficas de invertebrados. Teste de migração celular: Serão utilizados transwells para os ensaios de migração celular, onde o controle negativo (água do mar), controle positivo (Levedura, LPS e Soro fetal) e o tratado (Equinocromo), serão utilizados para estimular as células (106 cel/ml) a quimiotaxia.
     
  • Etapas e cronograma:  
    Todas as etapas descritas abaixo serão realizadas no CEBIMar.  As atividades serão realizadas aproximadamente 3 a 4 vezes por ano
     
    Coleta dos animais: Exemplares dos ouriços-do mar Lytechinus variegatus (n=30), machos e fêmeas , serão colhidos manualmente por mergulho livre . Não será necessário sacrificar os animais; após o periodo de experimento os animais serão reaclimatados e devolvidos ao mar
     
     
     
    Contagem dos celomócitos
     
    Teste de viabilidade fúngica
     
    Teste de migração celular
     
    Ensaios de fagocitose in vitro
     
    Índices de fagocitose
     
     
  • Palavras-chave: equinocromo, equinóides, imunidade inata, fagocitose, ouriço-do-mar. 
  • Condições ambientais: Nenhuma condição especial ;   
  • Área necessária no laboratório: Um laboratório e o biotério marinho 
  • Equipamentos de laboratório: pHmetro, centrífuga e microscópio de fase. 
  • Será necessário: Auxílio técnico para manutenção de estruturas ou material biológico na ausência dos participantes do projeto ;  Auxílio técnico para coleta de organismos ou observações de campo ;  Coleta antecipada de organismos ;  Utilização de embarcação do CEBIMar ;   

  • Outros serviços de laboratório:
  • Organismos a serem coletados: Ouriços-do-mar Lytechinus variegatus  
  • Locais para coleta: Ao redor da Ilha Tiasussê na praia de Barequeçaba 
  • Tipos de resíduos químicos e/ou infectantes a serem gerados durante o projeto:  
  • Quantidade de cada tipo de resíduo:
  • Periodicidade aproximada da geração dos resíduo:
  • Instituição(ções) de origem do projeto:

    • USP. Instituto de Ciências Biomédicas  Departamento de Biologia Celular e do Desenvolvimento 
     
  • Participante(s) do projeto:

    • Nome: Débora Alvares Leite Figueiredo  
    • Função no projeto: Mestrando 
    • Início das atividades no projeto: 01/06/2012  
    • Fim das atividades no projeto: 28/03/2014  
    • Nome: Douglas Amaral dos Santos  
    • Função no projeto: Biólogo 
    • Início das atividades no projeto: 01/06/2012  
    • Fim das atividades no projeto: 28/03/2014  
    • Nome: João Carlos Shimada Borges  
    • Função no projeto: Pós-doutorando 
    • Início das atividades no projeto: 01/06/2012  
    • Fim das atividades no projeto: 28/03/2014  
    • Nome: Paola Cristina Branco  
    • Função no projeto: Doutorando 
    • Início das atividades no projeto: 01/06/2012  
    • Fim das atividades no projeto: 28/03/2014  
     
  • Recurso(s) destinado(s) ao projeto:

    • Situação: Concedido 
    • Agência de fomento: Fapesp 
    • Tipo de recurso: Bolsa 
    • Especificar o tipo de recurso: A bolsa auxilia no custeio da estadia para o desenvolvimento do projeto. 
    • Recursos em nome de: Andrews Krupinski Emerenciano 
     

    Produção(ões) bibliográfica(s) gerada(s) pelo projeto:

    Total de produções bibliográficas: 0


  • Data de cadastro do projeto: 17/04/2012  
  • Data da última modificação: 30/08/2012  
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