Projetos de pesquisa em andamento

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Projeto de pesquisa


  • Avaliação de alterações morfológicas e moleculares induzidas por nanopartículas de dióxido de titânio (nano-TiO2) em embriões do ouriço-do-mar tropical Lytechinus variegatus (Lamarck, 1816)

     
  • Coordenador do projeto: José Roberto Machado Cunha da Silva  
  • Autor ou executor principal do projeto: Letícia Palmeira Pinto  
  • Número do projeto: 989  
  • Categoria: Mestrado 
  • Data de início das atividades no CEBIMar: 02/05/2018  
  • Data de término das atividades no CEBIMar: 29/05/2020  
  • Resumo: Nanopartículas (NPs) constituem uma fonte de poluição ambiental difusa e de difícil remediação, tornando-se assim, um grande e crescente problema ambiental. Dentre os diferentes tipos de NPs, as de dióxido de titânio (nano-TiO2) estão presentes em inúmeros produtos de consumo humano. Por decorrência dessa ampla utilização, as nano-TiO2 podem ser inseridas facilmente de maneira passiva em ecossistemas marinhos. Os ouriços-do-mar são considerados excelentes bioindicadores para avaliar a toxicidade de muitos compostos químicos que são considerados estressores ambientais, especialmente durante seus estágios embrionários. A exposição à NPs em estágios inicias pode, principalmente, implicar no desenvolvimento e estabelecimento dessas espécies, especialmente em águas costeiras onde as NPs estão menos difusas e em concentrações maiores. Considerando os efeitos nocivos em ambiente marinho, o presente trabalho tem por objetivo avaliar os efeitos da exposição a nano-TiO2 (1 e 5 μg/mL) em embriões do ouriço-do-mar tropical Lytechinus variegatus (12 e 24 h pós-fertilização).Para tanto, serão avaliados os seguintes parâmetros: morfológicos, levando em consideração malformações; perfil transcricional de genes e componentes de vias de sinalização induzidos frente ao estresse ambiental (HSPs e MPKs); e o possível acúmulo de nano-TiO2 por microscopia eletrônica de transmissão. Desta forma, os resultados trarão uma nova perspectiva para o potencial impacto da nano-TiO2  durante o desenvolvimento do ouriço-do-mar tropical, podendo contribuir com novas ferramentas para o biomonitoramento em ambiente marinho& 
  • Metodologia:  - Delineamento experimental
                 Os embriões serão cultivados em placas de 24 poços e divididos em dois grupos pós-fertilização (hpf): 12hpf e 24hpf e expostos a duas concentrações diferentes de nanoTiO2 (1 e 5 μg/mL). Os experimentos serão realizados em triplicata em três períodos distintos com os respectivos controles negativos e controles positivos (expostos a sulfato de cobre).
    - Fertilização para o teste de toxicidade
     Os gametas de indivíduos 3 machos e 3 fêmeas serão coletados das gônadas após indução com injeção de KCl–1M (40μL por g de peso corporal). Os ovos serão coletados em  FSW (filtred sea water) a 0,22 µm, os espermas serão recolhidos com pipeta pasteur, colocados em Eppendorfs estéreis no gelo até a fertilização. Após as coletas dos ovos será adicionado uma solução de 5mL de esperma (1:1000 em FSW) suspendendo os ovos para a fertilização acontecer. Aproximadamente 30 min após a fertilização os embriões serão expostos à nano-TiO2 suspensas em FSW (previamente sonicada) e incubados a 24ºC no escuro. Após 12hpf e 24hpf os embriões serão fixados em Formol 4% e monitorados no microscópio de luz.
    -Caracterização da nano-TiO2
    -Teste de Toxicidade em gametas
    -Morfologia e Microscopia de luz
    -Análise ultraestrutural embrionária       
    -Extração de RNA
    -Avaliação da expressão gênica por qPCR em tempo real
     
  • Etapas e cronograma: Coleta e Cultivo do embrião: Maio 2018 / Maio 2019 / Maio 2020
    Exposição ao TiO² : Maio 2018 / Maio 2019 / Maio 2020
    Morfologia e Microscopia de luz: Maio 2018 / Maio 2019 / Maio 2020
    Caracterização da nanopartícula : Jun 2018
    Análise ultraestrutural embrionária: Jul e Ago 2018 - Jul e Ago 2019
    Avaliação de genes de estresse: Jun 2018 - Dez 2019
    Disciplinas Jan 2018 - Set 2019
    Qualificação Fev 2019
    Analise estatística Dez 2018 - Maio 2020
     
     
  • Palavras-chave: Nanopartícula; Dióxido de TiO2; embrião de ouriço. 
  • Condições ambientais: Nenhuma condição especial ;   
  • Área necessária no laboratório: Bancada e aquário. 
  • Equipamentos de laboratório: Microscópio Centrifuga  
  • Será necessário: Montagem de alguma estrutura (estantes, aquários etc) ;  Auxílio técnico para coleta de organismos ou observações de campo ;  Coleta antecipada de organismos ;  Utilização de embarcação do CEBIMar ;   

  • Outros serviços de laboratório: Não há outros. 
  • Organismos a serem coletados: Ouriço-do-mar verde (Lytechinus variegatus). 
  • Locais para coleta: Ao redor do costão rochoso da praia do Cabelo Gordo. 
  • Tipos de resíduos químicos e/ou infectantes a serem gerados durante o projeto: Nenhum no CEBImar, pois os resíduos químicos serão transportados adequadamente para o local de origem. 
  • Quantidade de cada tipo de resíduo: Nenhum
  • Periodicidade aproximada da geração dos resíduo: Nenhuma
  • Instituição(ções) de origem do projeto:

    • USP. Instituto de Ciências Biomédicas   
     
  • Participante(s) do projeto:

    • Nome: Amanda Ribeiro Rosa  
    • Função no projeto: Mestrando 
    • Início das atividades no projeto: 02/04/2018  
    • Fim das atividades no projeto: 29/05/2020  
    • Nome: Andrews Krupinski Emerenciano  
    • Função no projeto: Doutorando 
    • Início das atividades no projeto: 01/01/2018  
    • Fim das atividades no projeto: 29/05/2020  
    • Nome: João Carlos Shimada Borges  
    • Função no projeto: Outra função 
    • Início das atividades no projeto: 01/02/2018  
    • Fim das atividades no projeto: 29/05/2020  
    • Nome: Luis Fernando Marques dos Santos  
    • Função no projeto: Co-orientador 
    • Início das atividades no projeto: 01/03/2018  
    • Fim das atividades no projeto: 29/05/2020  
    • Nome: Willian Reina Joviano  
    • Função no projeto: Mestrando 
    • Início das atividades no projeto: 01/01/2018  
    • Fim das atividades no projeto: 29/05/2020  
     
  • Recurso(s) destinado(s) ao projeto:

    Nenhum recurso incluído.  

    Produção(ões) bibliográfica(s) gerada(s) pelo projeto:

    Total de produções bibliográficas: 0


  • Data de cadastro do projeto: 26/03/2018  
  • Data da última modificação: 19/06/2018  

          

            Notícias

    

                  

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