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Projeto de pesquisa


  • Sucessão da comunidade bacteriana associada a uma possível doença no coral invasor Tubastraea tagusensis 

     
  • Coordenador do projeto: Marcelo Visentini Kitahara  
  • Autor ou executor principal do projeto: Aline Aparecida Zanotti  
  • Número do projeto: 971  
  • Categoria: Mestrado 
  • Data de início das atividades no CEBIMar: 21/08/2017  
  • Data de término das atividades no CEBIMar: 29/03/2019  
  • Resumo: Os ecossistemas recifais, ao longo da costa do Brasil, vêm sofrendo significativas alterações em decorrência da invasão dos corais-sol - a Tubastraea tagusensis é uma das duas espécies conhecidas popularmente por esse nome. Na Ilha de Búzios, litoral norte do estado de São Paulo, onde há abundância desses bioinvasores, foram recentemente visualizados alguns espécimes apresentando necrose no tecido. O presente estudo visa compreender a relação – ainda pouco explorada - da T. tagusensis com microrganismos simbióticos. Apoiado pelos princípios da teoria hologenômica tem como objetivos identificar as espécies de microrganismos simbiontes da T. tagusensis em seu estado saudável, para que seja possível analisar a sucessão da comunidade bacteriana associada em diversos estágios da necrose e buscar caracterizar o possível patógeno promotor da doença. Serão aplicadas técnicas de biologia molecular nos corais saudáveis e doentes, identificando os microrganismos, via sequenciamento parcial do gene 16S rDNA.  Por conseguinte, como resultados, espera-se inventariar a comunidade bacteriana associada a T. tagusensis, compreender melhor a teoria hologenômica e documentar o primeiro caso de doença neste coral bioinvasor.
     
  • Metodologia: Este projeta visa, de forma inédita, identificar a diversidade microbiana associada ao coral azooxantelado Tubastraea tagusensis (saudável e apresentando diferentes estágios de necrose) que serão coletadas ao largo da Ilha dos Búzios, litoral norte do Estado de São Paulo, utilizando a embarcação em colaboração com a doutoranda Andréia.  Uma vez coletadas, as amostras terão seus respectivos DNAs extraídos através de kits comerciais de extração por coluna.  Nesta etapa, utilizando marcadores bacterianos universais desenvolvidos por Watanabe e colaboradores (2001), será amplificada uma fração (~400pb) da subunidade menor da molécula de ácido nucléico ribossomal (16S rDNA). Para cada amplificação a ser realizada, ambos os primers utilizados possuirão identificação única (tag), permitindo desta forma o sequenciamento simultâneo de inúmeras amostras com a utilização de técnicas de sequenciamento de nova geração (neste caso possivelmente o multiplex - plataforma 454). Nesta etapa espera-se ter a cobertura/sequenciamento de aproximadamente 90% da diversidade bacteriana presente em cada espécime de coral analisada. Paralelamente, visando à obtenção de mais dados quantitativos, parte dos amplicons bacterianos obtidos a partir de cada espécime de coral será analisado utilizando-se da técnica de eletroforese em gel de gradiente de desnaturação (DGGE) desenvolvida por Muyzer e Smalla (1998). Destaca-se ainda que a identificação de cada grupo de sequências bacterianas será obtida através de análises filogenéticas onde serão utilizados programas como ARB, PHYML e MrBayes.
     
  • Etapas e cronograma: Primeiramente será realizada a coleta das colônias (saudáveis e doentes) de Tubastraea tagusensis, na segunda quinzena de agosto de 2017. Logo em seguida será realizada a extração DNA, que deverá ser finalizada durante o mês de outubro. A etapa seguinte consiste na amplificação do gene 16S, prevista para ocorrer nos meses de novembro até janeiro de 2018. Após este processo as amostras serão sequenciadas e em adição será realizada a eletroforese em gel de gradiente de desnaturação (DGGE) durante fevereiro de 2018. A partir de março de 2018 serão realizadas as análises filogenéticas e análises da diversidade microbiana, previstas para serem finalizadas dentro de três meses, março, abril e maio de 2018. Finalizado o processo analítico, será iniciada a redação dos artigos, que compreende a discussão dos resultados obtidos que deverá ser finalizada até novembro de 2018, a fim de que possa ser submetido o artigo científico para uma revista. A finalização e submissão da defesa ocorrerá no primeiro trimestre de 2019.
     
  • Palavras-chave: Teoria hologenômica; coral sol; microrganismo; simbiose; doença. 
  • Condições ambientais: Nenhuma condição especial ;   
  • Área necessária no laboratório: Será necessário o uso do Laboratório Molecular.  
  • Equipamentos de laboratório: Os equipamentos necessários do laboratório serão: Fluxo laminar, termociclador, pipetas, centrífugas, espaço na geladeira e freezer e eletroforese. 
  • Será necessário: Utilização de embarcação do CEBIMar ;   

  • Outros serviços de laboratório: Nenhuma 
  • Organismos a serem coletados: Serão coletados corais invasores da espécie Tubastraea tagusensis, popularmente conhecidos como coral sol.  
  • Locais para coleta: Ilha dos Búzios, litoral norte do Estado de São Paulo. 
  • Tipos de resíduos químicos e/ou infectantes a serem gerados durante o projeto: Não serão gerados resíduos infectantes, entretanto, resíduos químicos (majoritariamente álcool) serão gerados. 
  • Quantidade de cada tipo de resíduo: 1 litro de resíduos químicos.
  • Periodicidade aproximada da geração dos resíduo: 1 litro por ano.
  • Instituição(ções) de origem do projeto:

    • Outra instituição  UFPR 
     
  • Participante(s) do projeto:

    • Nome: Aline Aparecida Zanotti  
    • Função no projeto: Mestrando 
    • Início das atividades no projeto: 15/09/2017  
    • Fim das atividades no projeto: 21/12/2018  
     
  • Recurso(s) destinado(s) ao projeto:

    • Situação: Concedido 
    • Agência de fomento: Fapesp 
    • Tipo de recurso: Auxílio á pesquisa 
    • Especificar o tipo de recurso: #2014/01332-0 
    • Recursos em nome de: Marcelo Visentini Kitahara 
     

    Produção(ões) bibliográfica(s) gerada(s) pelo projeto:

    Total de produções bibliográficas: 0


  • Data de cadastro do projeto: 14/08/2017  
  • Data da última modificação: 01/09/2017  
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