Projetos de pesquisa em andamento

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Projeto de pesquisa


  • Caracterização do papel fisiológico dos esferulócitos de Echinodermata: utilização de ouriços-do-mar (Echinoidea) como modelo

     
  • Coordenador do projeto: Márcio Reis Custódio  
  • Autor ou executor principal do projeto: Vinicius Araújo  
  • Número do projeto: 922  
  • Categoria: Doutorado 
  • Data de início das atividades no CEBIMar: 01/07/2015  
  • Data de término das atividades no CEBIMar: 31/03/2019  
  • Resumo: Sabe-se muito acerca das células sanguíneas de vertebrados, contudo, a situação é diferente com os invertebrados. Nestes, o fluido celomático é correspondente ao sangue, e os celomócitos apresentam funções relacionadas. Porém, sabe-se pouco acerca do papel destas células. Nos equinodermos, somente o fagócito vêm sendo estudado, já os esferulócitos são negligenciados. Para estas últimas, até mesmo os aspectos básicos são desconhecidos. Assim, este projeto investigará as funções fisiológicas dos esferulócitos em Echinodermata, utilizando equinóides como modelo. Serão utilizados ouriços e bolachas-do-mar, cujos esferulócitos serão isolados, caracterizados e o conteúdo citoplasmático será identificado. Posteriormente, será avaliado o papel fisiológico e o local de origem destas células. Para a execução, serão realizados procedimentos tais como: centrifugação em gradientes de densidade, citometria de fluxo, histologia, microscopia eletrônica, espectrometria de massa e cultivo de larvas.
     
  • Metodologia: O projeto focará em quatro eixos: (1) Coleta, separação, identificação e caracterização dos esferulócitos, (2) Identificação da natureza química das esférulas citoplasmáticas, (3) estudo das funções fisiológicas e (4) Desenvolvimento e origem. Para o objetivo 1, será retirado líquido celomático com todas as subpopulações de celomócitos e em seguida as populações celulares serão separadas por gradiente de densidade, resina de troca iônica e citometria de fluxo. A identificação e caracterização se dará por citologia (citocentrifugados), microscopia eletrônica de transmissão e de varredura, observando-se a morfologia do núcleo e do citoplasma. Para o item 2, será realizada espectrometria de massa das subpopulações isoladas. A parte fisiológica (3) analisará a citotoxicidade: capacidade dos celomócitos em lisar eritrócitos de camundongo; atividade bactericida: capacidade de inibção do crescimento de culturas de Escherichia coli; Regeneração: presença e possível papel dos celomócitos durante o processo de regeneração; Transporte de oxigênio: análise da dinâmica dos esferulócitos em indivíduos submetidos a hipóxia e hiperóxia. Para o item 4, os organismos serão criados até o início da fase juvenil. Será realizada fecundação in vitro, criação das larvas até a metamorfose e as análises serão realizadas por cortes histológicos.
     
  • Etapas e cronograma: O projeto será realizado em quatro etapas, de acordo com os objetivos traçados: (1) Coleta, separação, identificação e caracterização dos esferulócitos, (2) Identificação da natureza química das esférulas citoplasmáticas, (3) Estudo de suas funções fisiológicas e (4) Desenvolvimento e origem. Na etapa 1, com previsão de duração entre 6-12 meses, a estrutura do Cebimar será importante para a coleta dos modelos de estudos, que se dará, provavelmente a cada 2 meses.  Contudo, os organismos serão levados para o laboratório de biologia celular de invertebrados marinhos, no Instituto de Biociências da USP, onde se dará o processamento das amostras. Na etapa 2, a identificação química será realizada no IB-USP, com o material/modelos de estudos coletados na etapa 1. Assim, não se fará necessário a utilização das dependências do Cebimar, salvo, se necessário, coletar mais organismos. Já nas etapas 3 e 4, com previsão de 6-12 meses cada, será necessário manipular experimentalmente (3) e cultivar (4) os organismos. Neste momento, a infraestrutura do Cebimar será imprescindível, pois os equinodermos devem ser estressados o mínimo possível e transportá-los por grandes distâncias (para o IB-USP) poderá interferir nos resultados.
     
  • Palavras-chave: Biologia celular, Celomócitos, Echinodermata, Fisiologia, Ouriço-do-mar 
  • Condições ambientais: Nenhuma condição especial ;   
  • Área necessária no laboratório: Sala dos tanques Bancada  
  • Equipamentos de laboratório: Aquários Microscópio Lupa Centrífuga  
  • Será necessário: Montagem de alguma estrutura (estantes, aquários etc) ;  Auxílio técnico para coleta de organismos ou observações de campo ;  Utilização de embarcação do CEBIMar ;   

  • Outros serviços de laboratório: Não se aplica 
  • Organismos a serem coletados: Ouriços regulares Echinometra lucunter, Lytechinus variegatus, Arbacia lixula, e os irregulares Clypeaster subdepressus, Encope emarginata e Mellita quinquiesperforata. 10 de cada espécie. 
  • Locais para coleta: Canal de São Sebastião. 
  • Tipos de resíduos químicos e/ou infectantes a serem gerados durante o projeto: Não se aplica. 
  • Quantidade de cada tipo de resíduo: Não se aplica.
  • Periodicidade aproximada da geração dos resíduo: Não se aplica.
  • Instituição(ções) de origem do projeto:

    • USP. Instituto de Biociências   
     
  • Participante(s) do projeto:

    • Nome: Licia Sales Oliveira  
    • Função no projeto: Outra função 
    • Início das atividades no projeto: 03/08/2015  
    • Fim das atividades no projeto: 01/01/2019  
    • Observações: Aluna de Doutorado no programa de Zoologia no IB-USP, ajudará com a coleta dos organismos e procedimentos de laboratório.
       
     
  • Recurso(s) destinado(s) ao projeto:

    • Situação: A solicitar 
    • Agência de fomento: Fapesp 
    • Tipo de recurso: Bolsa 
    • Especificar o tipo de recurso: Bolsa de Doutorado  
    • Recursos em nome de: Vinicius Araújo 
     

    Produção(ões) bibliográfica(s) gerada(s) pelo projeto:

    Total de produções bibliográficas: 0


  • Data de cadastro do projeto: 24/05/2015  
  • Data da última modificação: 02/10/2015  
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